Лечебно-профилактическая эффективность Гамапрена при экспериментальной инфекции мышей, вызванной вирусом простого герпеса 1 типа

Цель исследования: изучить лечебно-профилактическую эффективность препарата Гамапрен (ГП), действующим веществом которого являются фосфорилированные полипренолы, выделенные из листьев шелковицы, при различных вариантах экспериментальной инфекции, вызванной вирусом простого герпеса 1 типа (ВПГ 1) у мышей.

Материалы  и  методы:

Использовали ВПГ-1 (штаммы VR-3 и Л2. Опыты проводили на аутбредных белых мышей обоего пола массой 7-8 и 10-12 г, полученных из питомника  "Столбовая". Использовали коммерческий препарат ГП, который вводили мышам в дозе 20 мкг/мышь/0,2  мл. В качестве препарата сравнения применяли  коммерческий препарат Ридостин.  

Модель экспериментального  герпетического менингоэнцефалита создавали на мышах массой 7-8 г при заражении их в мозг 0,03 мл материала,  содержащего 10 ЛД₅₀ ВПГ-1.  Эффективность ГП оценивали по увеличению выживаемости  и средней  продолжительности  жизни  (СПЖ) животных в опытной группе по сравнению с контрольной группой.

Модель экспериментальной герпетической инфекции у мышей воспроизводили на  мышах массой 10-12 г. Для заражения использовали ВПГ-1 штамм Л2, прошедший 3 пассажа на белых мышах весом 7-8 г при внутримозговом заражении. Титр вируса при этом составил 7 lg ЛД₅₀/0,03 мл. ГП вводили в/б по 2-м схемам: профилактической (за 24 часа до заражения ВПГ-1) и лечебно-профилактической (одновременно с ВПГ-1). Также оценивали противовирусную активность ГП при введении до появления первых клинических признаков заболевания и на этапе инфекции с клинически выраженными признаками заболевания.

Результаты.  Показано, что ГП в дозе 20 мкг/мышь при п/к введении обладает выраженным лечебно-профилактическом действием при экспериментальной герпетической инфекции.  Противовирусная  эффективность ГП была выявлена как на модели экспериментального  герпетического менингоэнцефалита, так и при  введении мышам, инфицированным ВПГ-1 до появления первых клинических признаков заболевания и на этапе инфекции с клинически выраженными признаками заболевания. Выявлена эффективность ГП при клинически выраженном герпесе на фоне развивающейся неврологической симптоматики: препарат проявлял выраженное лечебное действие при ежедневном однократном введении  в течение острого периода (на 4-е, 5-е, 6-е и 7-е сутки после заражения ВПГ-1).         

Summary

Therapeutic and prophylactic efficacy of Gamapren in experimental infection of mice caused by herpes simplex virus type 1

Sanin A.V. *, Narovlyansky А.N.*,  Pronin A.V. *, Sanina V.Yu, Kozhevnikova T.N., Izmestieva Anastasia.V., Izmestieva AnnaV., Timofeeva T.Yu., Ozherelkov S.V.**

Introduction: Significance of herpesvirus infections in infectious pathology of small animals increases. Although a fairly large number of drugs are used to control these infections, the development and implementation of effective therapeutic agents remains an urgent task.

The aim of the investigation was to study the therapeutic and prophylactic efficacy of Gamapren (GP), the active ingredient of which is phosphorylated polyprenols isolated from mulberry leaves, in various variants of experimental infection caused by herpes simplex virus type 1 (HSV-1) in mice.

Materials and methods. HSV-1, strains VR-3 and L2, were used. Experiments were carried out on outbred white mice weighing 7-8 and 10-12 g. Commercial drug GP was used, which was administered to mice at a dose of 20 µg/mouse/0.2 ml. Commercial drug Ridostin was used as a comparison medication. 

The model of experimental herpetic meningoencephalitis was created in mice weighing 7-8 g following intracerebral inoculation with 0.03 ml of material containing 10 LD50 HSV-1.  GP efficacy was estimated by increase in survival rate and average life expectancy of the mice in experimental group compared with control group.

The model of experimental herpes infection in mice was reproduced in mice weighing 10-12 g. For infection HSV-1 strain L2 was used with the titer 7 lg LD50/0,03 ml. GP was introduced according to 2 protocols: preventive (24 hours prior to infection with HSV-1) and therapeutic (concomitantly with HSV-1). We also estimated antiviral efficacy of GP inoculated before emergence of the first clinical signs of the disease and at the stage of infection with clinically expressed signs of the disease.

Results. It is shown that GP at a dose of 20 µg/mouse exerts strong prophylactic and therapeutic effect in experimental herpetic infection.  Antiviral efficacy of GP was revealed both in model of experimental herpetic meningoencephalitis, and in mice infected with HSV-1 before emergence of the first clinical signs of the disease and at the stage of infection with clinically expressed signs of the disease. Also the efficacy of GP in clinically expressed herpes infection was revealed: GP showed a pronounced therapeutic effect after daily administration during the acute period (on the 4th, 5th, 6th and 7th day following infection with HSV-1).

Key words: Gamapren, herpes simplex virus type 1, antiviral medicines, feline herpesvirus infections, feline rhinotracheitis virus, 

Сокращения: Гамапрен (ГП), вирус инфекционного ринотрахеита кошек (ВИРК), ТЦД_{50 (}тканевая цитопатогенная доза, вызывающая гибель 50% клеток монослоя), Polyprenyl  Immunostimulant  (PI),  внутрибрюшинно (в/б); подкожно (п/к) 

В последние годы герпесвирусные инфекции получают все большее распространение среди домашних животных. Особенно заметно растет заболеваемость кошек инфекционным ринотрахеитом [12]. Возбудитель этой инфекции – ДНК-содержащий герпесвирус кошек типа 1 (feline herpesvirus type 1, или FHV-1), обладающий липопротеиновой оболочкой, относящийся к подсемейству α-герпесвирусов Alphaherpesvirinae. Помимо FHV-1, в это подсемейство входят также вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, вирус болезни Ауески, вирус болезни Марека, герпесвирус человека 1 и др. [1]. Возбудители характеризуются наличием липопротеиновой оболочки и содержат 2-цепочечную ДНК. Несмотря на то, что в настоящее время для лечения и профилактики герпетических инфекций используется достаточно большое количество иммуномодуляторов и противовирусных средств, поиск и внедрение препаратов, повышающих резистентность к герпетической инфекции, остается актуальной задачей [15]. Очевидно, что подобные препараты должны не только подавлять размножение вируса герпеса и способствовать коррекции вирусиндуцированного иммунодефицита, но и соответствовать требованиям к безопасности, включающим отсутствие токсичности, аллергенности и реактогенности.

В предыдущих исследованиях было показано, что препараты на основе фосфорилированных полипренолов подавляют размножение ряда вирусов в чувствительных культурах клеток, а также обладают терапевтической активностью при лечении вирусных заболеваний мелких домашних животных [2-7, 9,10]. 

Ключевые слова: Гамапрен, вирус простого герпеса 1 типа, противовирусные препараты, герпесвирусные инфекции кошек, вирус инфекционного ринотрахеита кошек,

Цель исследования: изучить лечебно-профилактическую эффективность препарата Гамапрен (ГП), действующим веществом которого являются фосфорилированные полипренолы, выделенные из листьев шелковицы, при различных вариантах экспериментальной инфекции, вызванной вирусом простого герпеса 1 типа (ВПГ 1) у мышей.

Материалы и методы

Вирус. Использовали ВПГ-1 (штамм VR-3), полученный из ГУ НИИВП им. О.Г. Анджапаридзе РАМН и штамм Л2 (коллекция вирусов НИИ вирусологии им.Д.И.Ивановского).

Животные. Использовали аутбредных беспородных мышей обоего пола массой 7-8 и 10-12 г, полученных из Филиала "Столбовая" ФГБУН "НЦБТ ФМБА".

Препараты. Использовали ГП производства ООО «ГамаВетФарм», содержавший 5 мг активного вещества в 1 мл. Исходный препарат разводили в 50 раз стерильной дистиллированной водой и вводили мышам в объеме 0,2  мл (20 мкг/мышь).

В качестве препарата сравнения использовали  Ридостин производства ЗАО «Вектор-Медика», п.Кольцово Новосибирской области, содержащий 8 мг активного вещества в 1 мл. Использовали дозу 200 мкг/мышь/0,2 мл, в/б,  обычно применяемую у мышей при моделировании  инфекции

Определение антивирусной активности  по подавлению симпластообразования в клеточной культуре.  Для оценки противовирусной активности ГП использовали культуру клеток VERO, которую заражали ВПГ1, штамм VR-3. В зараженной культуре оценивали количество симпластов.

Для культивирования клеток VERO использовали ростовую питательную среду: 2/3 среды Игла МЕМ (ПанЭко) и 1/3 среды   ДМЕМ   (ПанЭко),   15   МЕ/мл   гентамицина   (ICN,   США), 10 % эмбриональной телячьей сыворотки (ICN, США). Клетки рассевали в концентрации 1,5х10⁵ кл/мл в 24-луночных планшетах (ПанЭко, кат.№ ПК24о или аналогичные) по 1 мл в лунку. Культивировали в СО₂-инкубаторе при 37 ⁰С, 5 % СО₂ и 90 % влажности 24 часа до образования монослоя, после чего добавляли по 1 мл ВПГ-1  в разведении от 10^-3 до 10^-7 (исходный титр 10⁷ ТЦД₅₀/мл). В опытные лунки добавляли ГП в конечной концентрации 400 мкг/мл. В контрольные лунки вносили в том же объеме раствор плацебо. Через 24 часа подсчитывали число симпластов и вычисляли процент подавления симпластообразования по формуле:

X=A-(a*100)/b

где: a - количество симпластов в опытных лунках; b - количество симпластов в контрольных лунках.

Для экспериментов in vivo была отобрана серия ГП, после воздействия которого на клетки VERO оставалось 2 симпласта на лунку (в контроле – 68).

Оценку эффективности ГП при экспериментальном  герпетическом менингоэнцефалите проводили на мышах массой 7-8 г при заражении их в мозг 0,03 мл материала,  содержащего 10 ЛД₅₀ ВПГ-1 (штамм Л2, инфекционность-5,0-5, 5 ЛД₅₀/0,03 мл), что обеспечивало гибель животных в контрольной группе.  ГП вводили внутрибрюшинно в/б или п/к, или перорально по  лечебно-профилактической (-24часа, -4 часа, +4часа, +24 часа и +48 часов по отношению к заражению ВПГ-1) схеме. Срок наблюдения - 21 день. В каждой группе было по 20 животных. Эффективность ГП оценивали по увеличению выживаемости  и средней  продолжительности  жизни  (СПЖ) животных в опытной группе по сравнению с контрольной группой.

Модель экспериментальной герпетической инфекции у мышей воспроизводили на  мышах массой 10-12 г. Для заражения использовали ВПГ-1 штамм Л2, прошедший 3 пассажа на белых мышах весом 7-8 г при внутримозговом заражении. Титр вируса при этом составил 7 lg ЛД₅₀/0,03 мл. Мышей заражали в/б вируссодержащей 10%-ной суспензией мозга мышей (доза - 100 ЛД₅₀). ГП вводили в/б по 2-м схемам: профилактической (за 24 часа до заражения ВПГ-1) и лечебно-профилактической (одновременно с ВПГ-1). В качестве референс-препарата использовали Ридостин, который вводили за 24 часа до заражения ВПГ-1. В каждой группе было по 10 мышей, срок наблюдения составил 15 дней. Противовирусную активность определяли по увеличению выживаемости и СПЖ.

Биологическое титрование ВПГ-1 из мозга мышей на клетках VERO.

Для доказательства противовирусной активности ГП были проведены опыты биологического титрования вируса из мозга мышей на клетках VERO.

Титр ВПГ-1 в ткани мозга опытных и контрольных мышей, взятой на 6-й день после заражения (т.е. на пике инфекционного процесса), определяли после обработки культуры клеток 10-кратными разведениями суспензии мозга мышей. Наблюдение и учет ЦПД осуществляли на 3-4-й день после контакта клеток с инфекционным материалом.

Оценка противовирусной эффективности ГП in vivo в инкубационном периоде и на этапе клинически выраженной герпетической инфекции

На первом этапе исследовали противовирусную активность ГП при введении до появления первых клинических признаков заболевания.

Под наблюдением находились 4 групп мышей (по 16 в каждой). Всех мышей заражали ВПГ-1 в  дозе 10⁵ ТЦД₅₀ /0,5 мл, в/б + 0,2 мл физраствора; 2-я группа  – за 24 часа до заражения вводили Ридостин, в/б. 

3-я группа  – 3-хкратно вводили ГП (одновременно с ВПГ-1, через 24 и 48 часов после заражения), п/к. 

4-я группа  – 4-хкратно вводили ГП, п/к  (на 1-е, 2-е, 3-и, 4-е сутки после заражения, до появления первых клинических признаков заболевания).

На 2-м этапе изучали лечебное действие ГП у мышей с клинически выраженными признаками заболевания. Под наблюдением находились 3 группы животных (по 26 мышей в каждой). Всех мышей заражали ВПГ-1 в  дозе10⁵ ТЦД50 /0,5 мл, в/б + 0,2 мл физраствора, в/б;

2-я группа  – за 24 часа до заражения вводили Ридостин в дозе 200 мкг/мышь/0,2 мл, в/б.

3-я группа  –4-кратное п/к  введение ГП  на 4-е, 5-е, 6-е и 7-е сутки после заражения.

За мышами проводили ежедневное наблюдение в течение 14-и суток, выявляли больных и павших особей. Клинические признаки заболевания регистрировали с 4-х по 8-е сутки после заражения. У больных мышей наблюдали характерные признаки герпетической инфекции с поражениями ЦНС: вялость, взъерошенность шерсти, парезы задних конечностей, судороги с последующей гибелью. По окончании наблюдений, рассчитывали показатели летальности по каждой группе: отношение числа павших животных к общему количеству мышей в группе (в %) и СПЖ в сутках.

Результаты и обсуждение

1. Эффективность ГП при экспериментальном  герпетическом менингоэнцефалите

На модели экспериментального  герпетического менингоэнцефалита у мышей показано, что применение ГП по лечебно-профилактической  схеме защитный эффект составил 47%  при п/к введении, и был несколько ниже при других способах введения. Наибольшую СПЖ наблюдали при пероральном введении (таблица 1).

Таблица 1. Эффективность ГП при герпетическом менингоэнцефалите мышей

2. Лечебно-профилактическая эффективность ГП при экспериментальной герпетической инфекции у мышей  

Наибольший эффект был обнаружен у ГП при лечебно-профилактической схеме введения (0час) – выживаемость составила 90%, защита - 50%, а СПЖ  - 14,1±0,85. Аналогичным эффектом обладал и эталонный противовирусный препарат Ридостин (Таблица 2). В контроле выживаемость была 40%, а СПЖ  – 10,0±1,31.

Таблица 2. Эффективность ГП при экспериментальной герпетической инфекции мышей

Примечание: * Р< 0,05

Для доказательства противовирусной активности ГП in vivo были проведены опыты биологического титрования ВПГ-1  из мозга мышей на клетках VERO. Титр ВПГ-1 в ткани мозга опытных и контрольных мышей, взятой на 6-й день после заражения, определяли в результате обработки культуры клеток 10-кратными разведениями суспензии мозга мышей. Наблюдение и учет ЦПД осуществляли на 3-4 день после контакта клеток с инфекционным материалом. Титр ВПГ-1, полученного из мозга контрольных мышей  составил 5,0 lg ТЦД₅₀/мл. Титры ВПГ-1 из мозга мышей, которым вводили ГП, составляли 2,0 (-24ч) и 1,5 (0ч) lg ТЦД₅₀/мл, соответственно. Таким образом, ГП существенно снижал титр вируса (на 3,5-2,0 lg), что было сопоставимо с противовирусным действием  Ридостина, который снижал титр вируса на 3,5 (-24ч) lg ТЦД₅₀/мл (табл.3).

Таблица 3. Противовирусная эффективность ГП в опытах биологического титрования ВПГ-1 из мозга мышей на клетках VERO

3. Исследование антигерпетической активности ГП в эксперименте in vivo в инкубационном периоде и на этапе клинически выраженной инфекции. 

Как видно из данных, представленных в Табл.4, что доза ВПГ-1, использованная в данном опыте (10⁵ ТЦД₅₀), соответствует 1 ЛД₇₅. Ридостин  защищал 44% мышей (гр.2), а ГП в дозе 20 мкг/мышь после 3-кратного введения защищал 50% мышей; показатель СПЖ был значительно больше контрольного (гр. 1 и 3); после 4-кратного введения ГП защищал 57% мышей, а  СПЖ возрастала в 2 раза (группы 1 и 4).

Таблица 4 Противовирусная активность  ГП  в инкубационном периоде при экспериментальной инфекции, вызванной   ВПГ-1 

٭ - разница между показателями летальности  и СПЖ статистически достоверна (при Р ≤ 0,05) в группах 1 и 2; 1 и 3, 1 и 4.

Таблица 5. Противовирусная эффективность ГП при клинически выраженной инфекции, вызванной ВПГ-1

٭ - разница между показателями летальности и СПЖ статистически достоверна (при Р ≤ 0,05) в группах 1 и 2; 1 и 3;

Согласно данным, представленным в табл.5, доза ВПГ-1, использованная в данном опыте (10⁵ ТЦД₅₀) соответствует 1 ЛД₈₄ для мышей. Ридостин защищал 50% мышей (гр.2), а ГП, введённый 4-хкратно в течение острого периода,   вызывал защиту в 39% случаев:  летальность в группе 3 составила 61%; показатель СПЖ был достоверно больше контрольного (группа 1 и 3);

Препарат ГП, рекомендованный для профилактики и лечения герпесвирусных инфекций кошек, также обладает противовирусным действием по отношению к вирусам гепатита С [7], энцефаломиелита Тейлера [5], желтой лихорадки, диареи и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в чувствительных культурах клеток [2]. Кроме того, показана эффективность ГП при профилактике и лечении вирусных инфекций мелких домашних животных [4,6,9,10].

В настоящей работе  представлены результаты, характеризующие антивирусную активность ГП при инфицировании мышей ВПГ-1.  Показано, что ГП  при различных схемах введения обладает выраженным лечебно-профилактическом действием при разных формах экспериментальной инфекции.  Выявлена эффективность ГП при клинически выраженном герпесе на фоне развивающейся неврологической симптоматики: препарат проявлял выраженное лечебное действие при ежедневном однократном введении  в течение острого периода (на 4-е, 5-е, 6-е и 7-е сутки после заражения ВПГ-1). При этом ГП по протективной активности был сравним с Ридостином. Визуальное наблюдение за мышами, которым вводили ГП при появлении первых клинических симптомов, показало, что на фоне инъекций препарата клинические признаки прекращались через 2-3 суток и не регистрировались по крайней мере в течение всего периода наблюдений (14 суток).

Это может объясняться, в частности, способностью ГП активировать реакции врожденного иммунитета и блокировать вирусопосредованное нарушение таких реакций, что приводит к ранней элиминации вируса из организма. Либо ГП может непосредственно влиять на различные этапы жизненного цикла ВПГ-1, тем самым нарушая его репродукцию. Ранее было показано, что защитный эффект фосфорилированных полипренолов (ФП) при вирусных заболеваниях опосредован как  прямым противовирусным действием, так и иммуномодулирующей активностью препаратов, связанной с усилением продукции цитокинов [8]. Важным, на наш взгляд, является то обстоятельство, что ГП достаточно эффективен как при профилактике герпесвирусной инфекции, так и при использовании в период острого клинически выраженного заболевания у мышей, что дает основание для дальнейшего его продвижения в практику в качестве препарата для лечения инфекций, вызванных вирусами герпеса у мелких домашних животных.

В настоящее время большинство противовирусных препаратов, применяющихся для борьбы с герпесвирусными инфекциями собак и кошек, представляют собой аналоги тех или иных нуклеотидов или нуклеозидов  ДНК вируса герпеса, либо ингибиторы вирусной ДНК-полимеразы, и их безопасность зависит, в значительной степени, от того, насколько специфично их воздействие на вирус [15]. Не случайно, в связи с этим, что одним из немногих противовирусных препаратов, разрешенных в США для лечения кошачьего ринотрахеита, одного из самых распространенных инфекционных заболеваний домашних кошек [12], является Polyprenyl  Immunostimulant  (PI), безопасность которого, как и ГП, подтверждена клиническими испытаниями [13]. Препараты ГП и PI были одновременно разработаны и изучены в РФ и США в результате совместной Российско-американской программы в рамках проекта МНТЦ. Различие между данными препаратами состоит только в том, что фосфорилированные полипренолы ГП получают из листьев шелковицы, произрастающей на юге РФ, а сырьем для PI служит шелковица, распространенная в США. Кроме того, концентрация действующего вещества в ГП 0,5%, а в PI– 0,25%. И ГП и PI первоначально зарегистрированы для лечения герпесвирусных инфекций кошек, однако PI также проявил эффективность в контролируемых клинических испытаниях при сухой форме кошачьего инфекционного перитонита [14]. Об аналогичных свойствах ГП ранее также сообщалось в отечественных публикациях [11]. 

Заключение:

Таким образом, препарат ГП  в экспериментальном исследовании на мышах проявил выраженную антивирусную активность в отношении различных форм инфекции, вызванной ВПГ-1. Наибольшая эффективность ГП выявлена при введении по профилактической и лечебно-профилактической схемам.

1.Белоусова Р.В., Преображенская Э.А., Третьякова И.В. Ветеринарная вирусология. М.: КолосС, 2007. — 424 с.

2.Васильев А.Н., Ожерелков С.В., Козлов В.В., Пронин А.В., Санин А.В., Парфёнова Т.М., Изместьева А.В., Амченкова А.М., Кожевникова Т.Н., Степанова Т.Н., Наровлянский А.Н.  Противовирусная и иммуномодулирующая активность полипренилфосфатов при  вирусных инфекциях. Антибиотики и химиотерапия. 2008, 53, №3-4,с.3-8.

3.Глотова Т.И., Сильников В.Н., Королева Л.С., Кунгурцева О.В., Тихонов В.Л., Глотов А.Г. Противовирусная активность нового химического соединения. РВЖ СХЖ 2012 N1 с. 22-24.

4.Изместьева А.В., Саличев А.В., Мезенцева М.В., Березина Л.К., Ольшанская А.А., Амченкова А.М., Зубашев И.К., Козлов В.С., Ожерелков С.В., Пронин А.В., Санин А.В., Наровлянский А.Н. Иммуномодулирующая и противовирусная активность морапренилфосфатов (ГП) СпБ 2011 Мед.иммунол. 2011. Т.13 N4-5, с.522-3

5.Кожевникова Т.Н., Викторова Е.Г., Козлов В.Г., Наровлянский А.Н., Санин А.В., Пронин А.В., Ожерелков С.В. Морапренилфосфаты подавляют размножение вируса энцефаломиелита Тейлера и накопление вирусного белка VP3 в чувствительных культурах клеток BHK-21 и P388D1. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2007, №3, с. 26-30.

6.Кожевникова Т.Н., Ожерелков С.В., Изместьева А.В., Санина В.Ю., Наровлянский А.Н., Пронин А.В., Санин А.В. Влияние препаратов ГП и фоспренил, созданных на основе полипренолов растительного происхождения, на продукцию некоторых регуляторных цитокинов в норме и при экспериментальном клещевом энцефалите у мышей. Российский иммунологический журнал. 2008. Т. 11. № 2-3. С. 250.

7.Наровлянский А.Н., Дерябин П.Г., Седов А.М., Санин А.В., Пронин А.В. Противовирусная активность полипренилфосфатов при экспериментальной инфекции, вызванной вирусом гепатита С in vitro. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2012. № 5. С. 80-84.

8. Пронин А.В., Ожерелков С.В., Наровлянский А.Н., Данилов Л.Л., Мальцев С.Д., Деева А.В., Григорьева Е.А., Санин А.В.. Роль цитокинов в иммуномодулирующих эффектах фосфатов полипренолов – противовирусных препаратов нового поколения. Russian J.Immunol. 2000, v.5, N2, p.155-164.

9.Санин А.В., Савойская С.Л., Васильев И.К., Наровлянский А.Н., Пронин А.В., Е.В.Гордеева. Применение Гамапрена при лечении вирусных инфекций у кошек. Ветеринария Кубани 2009 №6 с.29-30.

10.  Санин А.В. Применение иммуномодуляторов при вирусных заболеваниях мелких домашних животных. Российский ветеринарный журнал. 2005 N1 с.38-42

11. Фурман И.М., Васильев И.К., Наровлянский А.Н., Пронин А.В., Cанин А.В. Применение препаратов на основе растительных полипренолов при различных формах кошачьего инфекционного перитонита. Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные. 2010. № 3. С. 42-44.

12. Looker, KJ; Garnett, GP; Schmid, GP (October 2008). "An estimate of the global prevalence and incidence of herpes simplex virus type 2 infection". Bulletin of the World Health Organization. 86 (10): 805–12

13.Legendre AM, Kuritz T, Heidel RE, Baylor VM (2017) Polyprenyl Immunostimulant in Feline Rhinotracheitis: Randomized Placebo-Controlled Experimental and Field Safety Studies. Front. Vet Sci. 27 February 2017  https://doi.org/10.3389/fvets.....

14. Legendre AM, Kuritz T, Galyon G, Baylor VM, Heidel RE. Polyprenyl Immunostimulant Treatment of Cats with Presumptive Non-Effusive Feline Infectious Peritonitis In a Field Study. Front Vet Sci. 2017 Feb 14;4:7. https://doi.org/10.3389/fvets....

15.  Thomasy S. M.,   Maggs D. J. A review of antiviral drugs and other compounds with activity against feline herpesvirus-1. Vet Ophthalmol. 2016 Jul; 19(Suppl 1): 119–130.

Опубликовано: Журнал «Ветеринария Кубани» №3, 2018