Ответы на вопросы Статьи Контакты
Из натуральных природных компонентов
Гамапрен
Главная : Статьи : Лечение герпесвирусных инфекций с помощью препаратов полипренолов

Лечение герпесвирусных инфекций с помощью препаратов полипренолов

А.Н. Наровлянский, Л.К. Березина, Л.Г. Веткова, Т.Н. Степанова, С.Л. Савойская, И.К. Зубашев, Н.В. Клицунова, М.В. Мезенцева, А.В. Пронин, А.В.Санин, ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Н.П. Косякова, НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН,

А.А. Ольшанская, М.М. Рахманина, Э.И. Элизбарашвили, ВГНКИ ветеринарных препаратов, г. Москва, РФ, Т. Куриц, Окриджская национальная лаборатория, Окридж, США

В настоящей работе установлено, что МПФ – препарат, во многом аналогичный фоспренилу, обладает высокой эффективностью при лечении инфекций, вызванных вирусами группы герпеса у различных животных. Возможные механизмы терапевтической активности МПФ служат предметом дальнейшего изучения.

Материалы и методы.

Модель экспериментальной герпетической инфекции у мышей воспроизводили на белых беспородных мышах массой 10-12 г. Для заражения использовали вирус простого герпеса 1 типа (ВПГ-1) штамм Л2 (коллекция вирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского), прошедший три пассажа на белых мышах весом 7-8 г после внутримозгового заражения. Титр вируса при этом составил 7 lg ЛД50/0,03 мл. Мышей заражали внутрибрюшинно (далее - в/б) вируссодержащей 10% суспензией мозга мышей (доза - 100 ЛД50). МПФ вводили в/б в дозе 400 мкг/мышь/0,2 мл, согласно двум схемам: профилактической (за 24 часа до заражения ВПГ-1) и лечебно-профилактической (одновременно с ВПГ-1). В качестве референс-препарата использовали коммерческий препарат ридостин, который вводили в дозе 100 мкг/мышь за 24 часа до заражения ВПГ-1. В каждой группе было по 10 мышей, срок наблюдения составил 15 дней. Противовирусную активность определяли по увеличению процента выживаемости животных, увеличению средней продолжительности жизни (СПЖ).

Полипренол

Также для доказательства противовирусной активности препаратов были проведены опыты биологического титрования вируса из мозга мышей на клетках VERO. Титр ВПГ-1 в ткани мозга опытных и контрольных мышей, взятой на шестой день после заражения, определяли в результате обработки культуры клеток 10-кратными разведениями суспензии мозга мышей. Наблюдение и учет ЦПД осуществляли на 3-4 день после контакта клеток с инфекционным материалом.

При воспроизведении модели экспериментального генитального герпеса у самцов морских свинок использовали ВПГ 2 типа (штамм ЕС, титр 6 lgТЦД50/мл). Степень выраженности инфекционного процесса оценивали по 4-балльной шкале, учитывая 4 основных признака: гиперемию, отечность, специфические элементы (везикулы, пустулы, изъязвления), орхит. МПФ вводили в/б в дозе 4 мг, четыррехкратно: за 24 часа до инфицирования, в момент заражения, через 24 и 48 часов после инфицирования.

В модели инфекции, вызванной ВБА у кроликов, использовали штамм «ГНКИ», полученный из музея ВГНКИ ветеринарных препаратов - лаборатории профессора В.И. Уласова. Кроликов породы шиншилла заражали в/м в объеме 1 мл в разведениях 10-4 или 10-5. Разведения вируса готовили на физиологическом растворе. Раствор МПФ (0,4%) вводили кроликам по лечебно-профилактической схеме (за 24 час до заражения, а затем ежедневно с первых по десятые сутки) по 2,5 мл подкожно и по 5,0 мл перорально двукратно в течение 3-10 дней. Наблюдение за животными производили в течение трех недель.

Исследование влияния МПФ на течение инфекции, вызванной вирусом ринотрахеита (ВРТ), проводили на девяти беспородных разнополых котятах в возрасте от 1,5-3,5 месяцев. До заражения смывы носоглоточные и конъюнктивы глаз, а также кал исследовали на наличие герпес-, парво- и калицивирусов методом ПЦР. После заражения ВРТ кал котят также исследовали методом электронной микроскопии. Сыворотку крови котят, полученную до заражения, исследовали на наличие вируснейтрализующих антител к ВРТ в реакции нейтрализации на культуре клеток.

В опытную группу были взяты пять котят, а в контрольную - четыре. Заражение каждого котенка проводили в/м по 1,0 мл, перорально (п/о) и интраназально по 0,5 мл вируса. При обнаружении клинических признаков заболевания проводили лечение 0,4% раствором МПФ перорально в дозе 0,3–0,7 мл. Наблюдение за состоянием вели с момента заражения до выздоровления в опыте в течение 3-5 недель.

Результаты и обсуждение

1. Экспериментальная герпетическая инфекция у мышей

Наибольший эффект был обнаружен у МПФ при лечебно-профилактической схеме введения (0 часов) – выживаемость составила 90%, защита - 50%, а СПЖ - 14,1±0,85. Аналогичным эффектом обладал и эталонный противовирусный препарат Ридостин (см. табл. 1). В контрольной группе выживаемость была 40%, а СПЖ – 10,0±1,31.

Доказательства противовирусной активности препаратов были получены в опытах биологического титрования ткани мозга мышей на клетках VERO. Титр ВПГ-1, полученного из мозга контрольных мышей, составил 5 lg ТЦД50/мл. Титры ВПГ-1 из мозга мышей, которым вводили МПФ, составляли 2,0 (- 24 ч) и 1,5 (0 ч) lg ТЦД50/мл, соответственно. Таким образом, МПФ существенно снижал титр вируса (на 3,5-2,0 lg), что было сопоставимо с противовирусным действием Ридостина, снижающим титр вируса на 3,5 (-24 ч) lg ТЦД50/мл.

Таблица 1. Эффективность МПФ при экспериментальной герпетической инфекции мышей.

группы животных

выживаемость, %

защита, %

СПЖ, M±m

МПФ - 24часа

70

30

13,0±1,22

МПФ 0 час

90

50

14,1±0,85*

ридостин -24 часа

90

50

14,3±0,66*

контроль вируса

40

-

10,0±1,31

Примечание: * Р< 0,05

2. На модели генитального герпеса самцов морских свинок показано, что МПФ оказывал выраженный статистически достоверный (р<0,01) противовирусный эффект. Максимальный терапевтический эффект МПФ (39,4%) отмечен на пятый день после заражения. Средняя продолжительность заболевания сокращалась на 4,3 суток по сравнению с контролем.

3. При экспериментальной летальной инфекции, вызванной ВБА у кроликов, установлено, что при лечебно-профилактической схеме п/к или п/о введение МПФ приводило к снижению летальности на 33,0%, и к значительному увеличению СПЖ (см. табл. 2). Инфицирование кроликов ВБА, разведенным на МПФ, с последующим лечением МПФ приводило к 90% выживаемости животных, что может свидетельствовать о наличии у МПФ вирулицидного действия по отношению к ВБА. В контроле (вирус разведен на растворе МПФ) наблюдалась 100% гибель кроликов (СПЖ – 5,3 суток); при разведении вируса на физиологическом растворе гибель всех контрольных животных наблюдалась на пятые сутки (табл. 2).

Таблица 2. Эффективность морапренолов при заражении кроликов ВБА (лечебно-профилактическая схема).

вирус

способ введения МПФ 2 раза/сут

защита, %

СПЖ, сутки

разведение на физрастворе

п/к 2,5мл

п/о 5,0мл

33,0

р<0,01

11,8

контроль вируса на физрастворе, в/м

-

0

5,0

4. Инфекционный ринотрахеит кошек.

Обследование котят до заражения, проведенное с помощью ПЦР, показало, что у двоих котят был обнаружен калицивирус, а у одного из них также и ВРТ. Титр нейтрализующих антител к вирусу герпеса у всех обследованных котят варьировал от 4,0 до 9,0 lоg.

По результатам электронной микроскопии были обнаружены единичные вирионы герпеса и калицивирусов у двух котят, а единичные вирионы калицивируса и парвовируса – у четырех. Таким образом, несмотря на заражение подопытных животных лишь ВРТ, в большинстве случаев наблюдали смешанные инфекции.

Лечение с помощью МПФ начинали с момента появления клинических признаков заболевания (депрессия, тусклая шерсть, обезвоживание, понос, рвота, отказ от еды, язвы в ротовой полости). МПФ вводили п/о в дозе 0,3 мл первые два дня, а затем по 0,5 мл (табл. 2), а также орошали слизистую ротовой полости дважды в день. Вспомогательная терапия: кламоксил, гамавит и пиобактериофаг, против обезвоживания вводили физиологический раствор и 5% глюкозу.

По предварительным результатам, выздоровление наступило у двух котят на 6-8 сутки (исчезновение язв, снижение обезвоживания, повышение активности, улучшение состояния шерсти), у трех котят лечение МПФ в дозе 0,7 мл дважды в день в сочетании с орошением ротовой полости привело к выздоровлению на 3-4 сутки. Исчезновение признаков заболевания в контрольной группе животных наступало на 22-30 сутки.

 Общей характеристикой для семейства герпесвирусов является быстрое размножение вируса в клеточных культурах с разрушением клеток, тенденция к установлению латентной инфекции в чувствительных нервных ганглиях после первоначальной инфекции. Во многих случаях наблюдается трансплацентарная передача и носительство вирусов. Обострение латентной инфекции часто наблюдают при иммуносупрессии, в различных стрессовых ситуациях. Ранее, при лечении кошек, больных инфекционным ринотрахеитом, была установлена высокая терапевтическая эффективность фоспренила, фосфорилированного производного полипренолов хвои. При лечении других вирусных инфекций фоспренилом было установлено, что в ряде случаев противовирусный эффект препарата может быть результатом активации некоторых звеньев врожденного иммунитета (синтез интерферона и ряда других цитокинов, активация макрофагов и естественных киллерных клеток), обеспечивающих повышение неспецифической резистентности организма (3, 4).

В настоящей работе установлено, что МПФ – препарат, во многом аналогичный фоспренилу, обладает высокой эффективностью при лечении инфекций, вызванных вирусами группы герпеса у различных животных. Возможные механизмы терапевтической активности МПФ служат предметом дальнейшего изучения.

Библиография.

1. Е.Д. Ильченко, С.Л. Савойская, Н.В. Клицунова, А.В. Санин. Диагностика вирусных заболеваний кошек и новый подход к их лечению с применением максидина и циклоферона. Материалы НПК «Ветеринария. Современные аспекты и перспективы», г. Орел, 2002, с. 12-14.

2. С.В. Ожерелков, Е.А. Третьякова и др. Новый подход к лечению вирусных инфекций собак и кошек с помощью комплексного применения в качестве средств этиотропной терапии препаратов фоспренил и максидин. Материалы НПК. «Ветеринария. Современные аспекты и перспективы», г. Орел, 2002, с. 27-30.

3. С.В. Ожерелков, О.Ю. Сосновская и др. Основные механизмы противовирусного действия фоспренила – препарата естественного происхождения. Киев, VII Межд. Конф. по проблемам ветеринарного обслуживания мелких домашних животных. 2-5 октября 2002 года.

4. A.V.Pronin, E.A.Grigorieva, et al. Polyprenols as possible factors that determine the instructive role of innate immunity in the acquired immune response. Russian J. Immunol. 2002, v. 7, N2, p. 135-142.

Журнал "Ветеринарная клиника". N2 2005.